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Primer qPCR

Marianne

Einzeller
Hallo zusammen,

ich schreibe im Moment an meiner medizinischen Doktorarbeit und kämpfe mich gerade durch die verschiedenen Methoden.
Für Genexpressionsanalysen mittels qPCR hatten wir intronüberspannende Primer designed, ich finde allerdings nirgends eine Erklärung, weshalb man das so macht.
Vielleicht hat ja jemand einen Tipp für ein Buch oder eine andere Quelle, wo diese Thematik erklärt wird...
Sorry, für die wahrscheinlich eher doofe Frage....
Gruß, Marianne
 

Joffi

Moderator
Moderator
Hi Marianne, das macht man, damit Amplifikate von cDNA und genomischer DNA unterschiedlich lang sind. Bei RNA Preps kann immer mal etwas gDNA durchrutschen. Wenn man ein/mehrere Introns überspannt, ist das Produkt von gDNA entweder zu lang um amplifiziert zu werden (=kein Problem) oder es wird amplifiziert, aber aufgrund der anderen Länge bemerke ich wenigstens, dass ich ein Problem habe. Ist das so verständlich?
 
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