alkalilyse, überstand (plasmid) isolieren

[Tippler]

Moin allerseits,

ich wollte mal nachfragen ob jemand von euch eine gute methode kennt um nach der alkali lyse von bakterienzellen den überstand (mit dem gewollten plasmid) zu isolieren.

die zellen wurden davor lysiert, neutralisiert und natürlich zentrifugiert.

ich brauche für meine versuche immer möglichst viel plasmid und "nur den überstand abpippetieren" ist ja nicht so effizienz.
da bleibt ja immer noch was an plasmid unten im genomischen dna / zelldebrys bereich.

gibt es eine mödlichkeit die genomische dna noch weiter von plasmid zu befreien?
über einen filter laufen lassen oder etwas in der art?




danke

 

[Joffi]

In aller Regel geht man davon aus, dass man mit dem klassischen, von Dir beschriebenen Vorgehen einen sehr großen Anteil des Plasmids bereits im Überstand hat. Eine erneute Extraktion des Pellets geht im Prinzip natürlich schon, habe ich aber in der Praxis noch nicht gehört. Wer viel Plasmid braucht, zieht halt viel Kultur hoch
Wo man noch Spielraum hat, ist eher die Effizienz, mit der man jetzt das Plasmid aus dem Überstand holt. Neben der klassischen Fällung ist da heutzutage das Silica-Säulchen Routine und die gibt es von diversen Firmen optimiert für alles mögliche, u.a. auch für besonders hohe Ausbeuten.

 

[maliha3492]

Wäre mal jemand so lieb und würde mir zwei Begriffe erklären?
Einmal wäre das das "Einzelgen-Erkrankung" und zum anderen " chromosomale Translokation"

Hoffe auf schnelle Hilfe