Hallo,
ich führe momentan einen Ca2+ Assay auf einer 96 Well Plate durch.
Die Ergebnisse das Assays sind auch überwiegend gut, jedoch zeigt die Erste (A) und die Letzte Reihe (H) des Assays immer falsche Werte an.
Interessant ist hierbei, auch die + und - Kontrolle haben komplett andere Werte als in den anderen Wells! (Die Werte in Reihe A & H sind alle Höher!)
Wohlgemerkt bei diesem Assay pipettiere ich mit einer Multichannel Pipette. Bei dem überführen der Substanzen ob nun von einer anderen 96-Well Platte oder einem Reservoir achte ich immer stark darauf das alle Pipettenspitzen gleich viel Substanz aufgenommen haben.
Als kleiner Hinweis die Wells der ersten und letzten Zeile werden zeitgleich wie die anderen Wells der Spalte befüllt. (Mit der gleichen Pipette)
Es wird übrigens ein Farbstoff verwendet welcher von Licht geschützt werden muss. Der Assay wird für die Inkubation mit Alufolie abgedeckt.
Ich stehe noch nicht lange im Labor, kann mir jemand gegebenenfalls Tipps nennen, woran es liegen könnte?
Hat jemand schon mal ähnliche Erfahrungen gemacht bei einem Readout? Ausgewertet wird mit einem Gerät welches die Fluoreszenz Aktivität bestimmt.
Ich würde mich über jeden Hinweis freuen!
Manchmal gibt es ja merkwürdige Fehler die andere Leute schon mal gemacht haben, hoffentlich ist jemand von euch dabei mit einer ähnlichen Erfahrung
Grüße
Mourinho
ich führe momentan einen Ca2+ Assay auf einer 96 Well Plate durch.
Die Ergebnisse das Assays sind auch überwiegend gut, jedoch zeigt die Erste (A) und die Letzte Reihe (H) des Assays immer falsche Werte an.
Interessant ist hierbei, auch die + und - Kontrolle haben komplett andere Werte als in den anderen Wells! (Die Werte in Reihe A & H sind alle Höher!)
Wohlgemerkt bei diesem Assay pipettiere ich mit einer Multichannel Pipette. Bei dem überführen der Substanzen ob nun von einer anderen 96-Well Platte oder einem Reservoir achte ich immer stark darauf das alle Pipettenspitzen gleich viel Substanz aufgenommen haben.
Als kleiner Hinweis die Wells der ersten und letzten Zeile werden zeitgleich wie die anderen Wells der Spalte befüllt. (Mit der gleichen Pipette)
Es wird übrigens ein Farbstoff verwendet welcher von Licht geschützt werden muss. Der Assay wird für die Inkubation mit Alufolie abgedeckt.
Ich stehe noch nicht lange im Labor, kann mir jemand gegebenenfalls Tipps nennen, woran es liegen könnte?
Hat jemand schon mal ähnliche Erfahrungen gemacht bei einem Readout? Ausgewertet wird mit einem Gerät welches die Fluoreszenz Aktivität bestimmt.
Ich würde mich über jeden Hinweis freuen!
Manchmal gibt es ja merkwürdige Fehler die andere Leute schon mal gemacht haben, hoffentlich ist jemand von euch dabei mit einer ähnlichen Erfahrung

Grüße
Mourinho