Jules Aurelien
Einfacher Mehrzeller
Guten Tag,
Zusammengefasst wurde mein Projekt im Bereich der Molekularbiologie von April bis Juni so durchgeführt:
Es ging um die Expression-Nachweis von Taq-Polymerase in einem Stamm von E.coli, der das Gen für dieses Protein trägt. Nach dem Zell-Anzucht wurde die mRNA extrahiert und anschließend wurde die genomic DNA mit der DNase I verdaut. Danach wurde eine RT-PCR mit Oligo-(dt)18-Primer durchgeführt. An dieser Stelle haben wir übersehen, dass Oligo-(dt)18-Primer wegen der Kette von 12-20 Deoxythymidinen nur für die eukaryotischen Zellen spezifisch ist. Danach wurden zwei PCR mit den 2 eigenen designten Primer-Paare für das Taq-Polymerase-Gen durchgeführt und wurden die gewünschten Produktgröße (Gel-Elektrophorese) erhalten.
Wie gesagt, wurden die Oligo-(dt)18-Primer für die Umschreibung der mRNA in cDNA verwendet und dieser Schritt hätte funktioniert, obwohl E. Coli ein Prokaryote ist (Das würde beudeutet, dass die mRNA keine Poly-(A)-Schwänze, an die sich Oligo (dT) -Primer mit der 12-20 Deoxythymidinen-Kette anlagern können).
Hätte jemand eine Erklärung für diese Ergebnisse? Oder ein Paper, wo es darüber diskutiert wurde?
Liebe Grüße
Jules.
Zusammengefasst wurde mein Projekt im Bereich der Molekularbiologie von April bis Juni so durchgeführt:
Es ging um die Expression-Nachweis von Taq-Polymerase in einem Stamm von E.coli, der das Gen für dieses Protein trägt. Nach dem Zell-Anzucht wurde die mRNA extrahiert und anschließend wurde die genomic DNA mit der DNase I verdaut. Danach wurde eine RT-PCR mit Oligo-(dt)18-Primer durchgeführt. An dieser Stelle haben wir übersehen, dass Oligo-(dt)18-Primer wegen der Kette von 12-20 Deoxythymidinen nur für die eukaryotischen Zellen spezifisch ist. Danach wurden zwei PCR mit den 2 eigenen designten Primer-Paare für das Taq-Polymerase-Gen durchgeführt und wurden die gewünschten Produktgröße (Gel-Elektrophorese) erhalten.
Wie gesagt, wurden die Oligo-(dt)18-Primer für die Umschreibung der mRNA in cDNA verwendet und dieser Schritt hätte funktioniert, obwohl E. Coli ein Prokaryote ist (Das würde beudeutet, dass die mRNA keine Poly-(A)-Schwänze, an die sich Oligo (dT) -Primer mit der 12-20 Deoxythymidinen-Kette anlagern können).
Hätte jemand eine Erklärung für diese Ergebnisse? Oder ein Paper, wo es darüber diskutiert wurde?
Liebe Grüße
Jules.