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In unserem Biologie-Forum kann jeder seine Fragen zur Biologie stellen - und anderen bei Fragen helfen.
Hallo liebe Freunde!
Ich hoffe das ich in diesem Forum richtig bin.
Und zwar geht es um folgendes: Ich bin im letzten Jahr meiner BTA Ausbildung und zurzeit machen wir eine Klonierung als Versuch. Dabei ist Ecoli mit PUCD der Vektor und Ecoli mit pucdLacZ+ soll als Insert dienen. Soweit alles gut. Von beiden Plasmiden eine DNA Isolierung gemacht, hat noch alles geklappt, Konzentration für den Restriktionsverdau bestimmt und diesen durchgeführt alles Top. Nun das Problem. Als wir eine Gelelektrophorese gestartet haben konnte man bei pucd die Bande wunderbar erkennen und ausstanzen. Bei dem lacZ gen allerdings war nichts. Gar nichts. Nichts ungeschnittenes (falls der Verdauung nicht geklappt hat) gar nichts. Bei allen Gruppen die den Insert vorbereiten sollten. Nun haben wir nochmal von vorne angefangen (dieselben Gruppen haben nach erneut behandelt) und wieder nichts! Nichts im gel. Der Ladder und pucd normal waren aber super zu erkennen. Heute haben wir den Ansatz erneut gemacht (und dieses mal die ganze Klasse) und jeder einzelne von uns sollte den verdau mit lacZ machen. Und welch eine Überraschung: es war wieder nichts im gel. Wir haben drei Kontrollen laufen lassen mit den einzelnen Enzymen (Bam H1 und Hind3) um zu sehen ob eines davon vllt fehlerhaft ist. Beide schneiden aber. Ein anderer Ansatz wurde kontrolliert komplett ohne verdau auch da ist keine DNA erkennbar gewesen. Die Lehrerin ist genauso ratlos wie wir...
Zur Info: 1% Agarosegel
Puffer war TAE und die Voltspannung 106... das verrückte ist das auf jeden Fall DNA VOR dem restriktionsverdau da ist, denn man muss ja eine Konzentration bestimmen, und die war auch immer sehr gut. Vielleicht hat ja jemand eine Idee wo der Fehler liegt den anscheinend 17 Leute und Lehrerin machen, oder hatte schon einmal ein ähnliches Problem.
Ich danke im Vorraus!!
Ich hoffe das ich in diesem Forum richtig bin.
Und zwar geht es um folgendes: Ich bin im letzten Jahr meiner BTA Ausbildung und zurzeit machen wir eine Klonierung als Versuch. Dabei ist Ecoli mit PUCD der Vektor und Ecoli mit pucdLacZ+ soll als Insert dienen. Soweit alles gut. Von beiden Plasmiden eine DNA Isolierung gemacht, hat noch alles geklappt, Konzentration für den Restriktionsverdau bestimmt und diesen durchgeführt alles Top. Nun das Problem. Als wir eine Gelelektrophorese gestartet haben konnte man bei pucd die Bande wunderbar erkennen und ausstanzen. Bei dem lacZ gen allerdings war nichts. Gar nichts. Nichts ungeschnittenes (falls der Verdauung nicht geklappt hat) gar nichts. Bei allen Gruppen die den Insert vorbereiten sollten. Nun haben wir nochmal von vorne angefangen (dieselben Gruppen haben nach erneut behandelt) und wieder nichts! Nichts im gel. Der Ladder und pucd normal waren aber super zu erkennen. Heute haben wir den Ansatz erneut gemacht (und dieses mal die ganze Klasse) und jeder einzelne von uns sollte den verdau mit lacZ machen. Und welch eine Überraschung: es war wieder nichts im gel. Wir haben drei Kontrollen laufen lassen mit den einzelnen Enzymen (Bam H1 und Hind3) um zu sehen ob eines davon vllt fehlerhaft ist. Beide schneiden aber. Ein anderer Ansatz wurde kontrolliert komplett ohne verdau auch da ist keine DNA erkennbar gewesen. Die Lehrerin ist genauso ratlos wie wir...
Zur Info: 1% Agarosegel
Puffer war TAE und die Voltspannung 106... das verrückte ist das auf jeden Fall DNA VOR dem restriktionsverdau da ist, denn man muss ja eine Konzentration bestimmen, und die war auch immer sehr gut. Vielleicht hat ja jemand eine Idee wo der Fehler liegt den anscheinend 17 Leute und Lehrerin machen, oder hatte schon einmal ein ähnliches Problem.
Ich danke im Vorraus!!
