Polymerase-Kettenreaktion

[leeenaks]

Hallo!

Ich habe eine Frage zur Polymeras-Kettenreaktion. Und zwar werden bei der PCR ja die Sequenzen in der DNA vervielfältigt, die sich wiederholen, also die VNTR's. Was ich nicht verstehe ist wie man herausfindet welche Sequenz die Primer haben müssen?! Ich habe gelesen, dass die Sequenz, die die VNTR's umgibt bei jedem Menschen identisch ist. Stimmt das? Oder wie findet man die Sequenz ansonsten heraus?

Danke im Voraus...

Lena.

 

[Joffi]

Hallo Lena!
Erst einmal: Die PCR ist nicht nur dazu gut, VNTRs zu vervielfältigen, sondern kann das mit nahezu jeder beliebigen Zielsequenz, solange man Primer dafür hat. Speziell bei VNTRs ist es in der Tat so, dass die Primer bekannt sind und immer gleich eingesetzt werden können, da sie um die VNTRs herum platziert sind (immer "in der Regel" gesprochen *g*). Das heisst, wenn man einmal weiß, wie man das technisch machen kann, dann funktioniert das bei DNA jeder beliebigen Person.
In der heutigen Zeit ist es aber auch kein Problem, jede andere Stelle als Ziel zu wählen, da die Daten des humanen Genomprojekts in öffentlichen Datenbanken zur Verfügung stehen.

 

[Seven]

Hy, ich bin auch gerade bei der PCR dabei und ich habe eine Frage

Also, wie ich die PCR verstanden habe läuft das so:

Man hat einen (zu) kurzen DNA Strang, man will mehr von dem genetischen Material, also erhitzt man den Strang bist die WBBs sich lösen und zwei Einzelstränge vorliegen.

Dann gibt man sie in eine Lösung mit ganz vielen Nucleotiden drin, die sich dann wieder an die beiden Einzeltränge anlagern und zak hat man aus einem Strang 2 gemacht.

Die Fragen die sich mir nun stellen sind, wozu brauche ich einen Primer (ist doch eigentlich nur eine kleine Basensequenz, warum muss gerade die sich als erstes anlagern?) und wozu eine Taq-Poylmerase ?

(Warum würde es so nicht funktionieren wie ich es mir oben gedacht habe ?)

LG S.

EDIT: OK habe nochmal gegoogelt und bin dahin gekommen LINK (BILD 11)

Ok, ich weiss jezz also was eine Taq-Polymerase ist und auch was ein Primer ist. Die Frage die geblieben ist, lautet: Warum können sich keine Nucleotide an die Einzelstränge anlagern, wenn sich nicht vorher ein Primer angelagert hat ?

Zweite Frage, "saugt" die Taq-Polymerase dann alle in der Lösung vorhandenen Nucleotide heran und bindet sie an das komplemäntere Nucleotid des Einzelstranges oder wie geschieht das anbinden der in der Lösung vorhandenen Nucleotide ?

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Andere Sache die mir dazu einfällt: Transkription, da läuft die RNA Polymerase ja am codogenen DNA Strang entlang und bildet einen komplementären Strang wo Thymin durch Uracil ersetzt wurde. Aber die ganzen Nucletide die die RNA Polymerase da nun ran bindet schwimmen die dort auch überall herum oder "erschafft" die RNA Polymerase die Nucletide einfach ?

Ich hoffe ich überfordere euch nicht :S

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Hier noch ein kleiner Film, der mir auch geholfen hat Film

Danke !

 

[Joffi]

Hui da ist einiges im Argen. Du hast in so fern recht, als das die Nukleotide, die in der Suppe rumschwimmen, Wasserstoffbrücken zu den Nukleotiden eines Einzelstrangs bilden könnten (und vermutlich hier und da auch tun). Das hilft uns nur noch nicht wirklich weiter, denn wir wollen ja einen Strang (!) haben und kein Mosaik aus Einzelteilen. Dazu müssen jeweils die 3'OH und 5'Phosphat Reste ligiert werden, also kovalent gebunden werden. Und dazu brauchen wir nun die Polymerase. Die Polymerase wiederum brauch ein Ende, an dem sie mit ihrem Ko anfangen kann. Irgendein erstes 3'OH muss schon da sein, sonst gibt es ja nichts zum verlägern. Und das sind dann die Primer. Diese bringen außerdem eine Spezifität in das Ganze, sonst würde die Pol ja alles nachbauen, und nicht nur das Ziel.

 

[Seven]

Danke Joffi =)