Proben Normalisierung für SDS-PAGE

[mondkuchen]

Hallo, gibt es vielleicht eine einfache Formel um seine Proben zu normalisieren?

Beispiel: Proben Entnahme zu drei Zeitpunkten einer Überexpression und OD600 Messung

Probe 1, OD=0.6
Probe 2, OD=1.1
Probe 3, OD=1.7

Pellett der drei Proben soll nun normalisiert werden um überall gleich viel Protein zu laden.
Wie kann ich das berechnen? Lg

 

[Joffi]

Hi! Deine Angaben sind noch nicht 100pro nachvollziehbar. Ich vermute, da soll ein bestimmtes Volumen von einem resuspendierten Pellet entnommen werden? Wenn wir davon ausgehen wollten und außerdem annähmen, dass die OD linear proportional zur Proteinkonzentration wäre, dann kannst Du einfach ein mittleres Volumen durch die OD teilen.
Wenn die Spannbreite der möglichen Volumina z.B. 5-50µl wäre, dann würden wir da jetzt mal mitten rein greifen und willkürlich 25µl bestimmen*. Von Probe 1 dann 25/0,6 µl, von Probe 2 25/1,1 µl usw. => auf die Art hast Du nachher von jeder Probe gleichviel von dem genommen, was die OD verursacht hat.

*In der Praxis sucht man sich oft die am schwächsten konzentrierte Probe raus (hier Probe 1) und nimmt davon das maximal mögliche Volumen. Dann rechnet man das entsprechende Volumen für die anderen aus: Volumen für Probe x = Volumen Probe 1 / OD von Probe x.