Ich schreib am Dienstag Klausur und soll da einen restriction digest (Keine ahnung wie das auf deutsch heißt) selber zusammenstellen. (genauer gesagt einen double digest)
Dazu muss ich bei gegebener Konzentration von DNA und Informationen über die Restriktionsenzyme den richtigen Puffer und die richtige Menge von Enzymen und Puffer ermitteln.
Damit ihr euch das besser vorstellen könnt: wir bekommen so eine Liste und sollen die ausfüllen:
DNA (2 microgramm/microliter) ... microliter
10X buffer ....... ... microliter (hier den richtigen buffer und das Volumen angeben)
KpnI (5units/microliter) ...microliter
SacI (5 units/microliter) ... microliter
Wasser (auf 30 microliter auffüllen)
Ich weiß, dass eine Unit im Enzym 1000 bp in einem microliter schneidet. (Glaub ich jedenfalls).
Wenn jetzt ein Vector eine Größe von 3500 bp hat und das Enzym hat 5U/microliter, dann bräuchte ich laut Dreisatz davon eigentlich 0,7 microliter, oder?
Wir sollen dann wohl auf einen microliter aufrunden, weil das realistischer ist als 0,7 microliter zu pippetieren.
Jetzt haben wir allerdings ein anderes Beispiel, in dem der Vector 6859 Bp groß ist.
Da müsste man ja theoretisch etwas über 1 Microliter nehmen (1.4)
Aber in einem Beispiel aus der Vorlesung haben wir auch einen Microliter genommen. Wird das einfach wieder abgerundet, oder haben wir da was falsch verstanden???
Bis auf das hab ich eigentlich alles verstanden, man muss mehr Enzym nehmen wenn es eine niedrigere Aktivität hat. Der Puffer wird nach dem dilution factor berechnet, der angegeben ist...
Aber das ist mir ein totales rätsel.
Ich hoffe ihr könnt euch vorstellen was für eine Aufgabe ich meine. Hört sich alles etwas wirr an.
Dazu muss ich bei gegebener Konzentration von DNA und Informationen über die Restriktionsenzyme den richtigen Puffer und die richtige Menge von Enzymen und Puffer ermitteln.
Damit ihr euch das besser vorstellen könnt: wir bekommen so eine Liste und sollen die ausfüllen:
DNA (2 microgramm/microliter) ... microliter
10X buffer ....... ... microliter (hier den richtigen buffer und das Volumen angeben)
KpnI (5units/microliter) ...microliter
SacI (5 units/microliter) ... microliter
Wasser (auf 30 microliter auffüllen)
Ich weiß, dass eine Unit im Enzym 1000 bp in einem microliter schneidet. (Glaub ich jedenfalls).
Wenn jetzt ein Vector eine Größe von 3500 bp hat und das Enzym hat 5U/microliter, dann bräuchte ich laut Dreisatz davon eigentlich 0,7 microliter, oder?
Wir sollen dann wohl auf einen microliter aufrunden, weil das realistischer ist als 0,7 microliter zu pippetieren.
Jetzt haben wir allerdings ein anderes Beispiel, in dem der Vector 6859 Bp groß ist.
Da müsste man ja theoretisch etwas über 1 Microliter nehmen (1.4)
Aber in einem Beispiel aus der Vorlesung haben wir auch einen Microliter genommen. Wird das einfach wieder abgerundet, oder haben wir da was falsch verstanden???
Bis auf das hab ich eigentlich alles verstanden, man muss mehr Enzym nehmen wenn es eine niedrigere Aktivität hat. Der Puffer wird nach dem dilution factor berechnet, der angegeben ist...
Aber das ist mir ein totales rätsel.
Ich hoffe ihr könnt euch vorstellen was für eine Aufgabe ich meine. Hört sich alles etwas wirr an.