Sequenzierung der DNA

[Hubert]

Kann mir jemand eine Sequenzierungstechnik für die DNA erklären?
Ich wäre euch sssssssoooooooooooooooooo dankbar!!!
Grüsschen

 

[Glückssternchen]

Verfahren nach Sanger

Also... weiß net ob ich des gut erklären kann...mal schaun
Das Verfahren nach Sanger funktioniert so, dass die Replikation von DNA mithilfe von künstlich modifizierten Nucleotiden basenspezifisch abgebrochen wird. Man hat also DNA Teilstränge von unterschiedlicher Länge herausbekommen.Durch Gelektrophose lässt sich dann auf die Basensequenz der DNA-Matrize rückschließen.
Die abgewandelten Nucleotide haben am 3'-Kohlenstoffatom keine OH-Gruppe und wenn die in die Kette der DNA eingebaut werden, wird verhindert dass sich ein weiteres DNA-Nucleotid anfügt. Die Synthese bricht also an dem Punkt ab.
Das Verfahren verläuft wie folgt:
1.) Denauturierung der DNA in Einzelstränge
2.) Hybridisierung der Einzelstränge durch radioaktiv markierte Primer
3.) Verteilung der Probe auf 4 Reagenzgläser (Jeder Ansatz beinhaltet die 4 DNA-Nucleotide und auch eine geringe Menge der modifizierten Nucleotide)


Die DNA_Polymerasen beginnen in 5'-3' Richtung zu katalysieren. Es werden intakte und modifizierte Nucleotide zufällig eingebaut, so dass die Replikation entweder durchläuft oder an einer bestimmten Stelle die Sequenz unterbricht. In jedem Ansatz bilden sich also unterschiedlich lange Stränge.
Diese Stränge aus den vier Ansätzen werden durch parallele Gelektrophorese aufgetrennt. Durch die radioaktiven Markierungen kann das Bandenmuster durch eine Autoradiographie leicht sichtbar gemacht werden.
Die Basensequenz der vier Bandenreihen is komplementär zur Sequenz der DNA-Matrize

Viel Spaß.. *fg*
Greetz
Sternchen