Southern Blotting bei FSHD

[ShadowGaja]

Hallo,

Ich bin in der Stufe Q1 im Bio LK. Wir müssen bestimmte Verfahren in Gruppen erklären anhand von einer Krankheit. Mein Thema ist die Southern Blot Hybridisierung anhand der Krankheit fazio-skapulo-humerale Muskeldystrophie.
Meine Frage ist nun wie genau man die Krankheit mit der Methode diagnostiziere kann. Herausgefunden habe ich schon, dass wenn man die Krankheit hat eine Deletion auf dem Chromosom 4 im Abschnitt D4Z4 statt gefunden hat. Normalerweise hat man dort eine Wiederholung von ca. 3,3K Basenpaaren 11 bis 100mal. Erkrankte dagegen haben diese Wiederholung nur 1 bis 10 mal. Auf Chromosom 10 befindet sich der Abschnitt D4Z4 nochmal komplett.
Wird nun bei dem Southern Blot verfahren eine Gensonde mit den 3,3K Basenpaaren verwendet? Und wenn ja wird nachher die Position vom D4Z4 Abschnitt vom Chromosom 4 und 10 durch die Gelelektrophorese verglichen da eins ja kürzer sein muss?

Ich wollte mich da nur einmal versichern da im Internet es nicht wirklich erklären und sind dabei auch oft auf Englisch.

Würde mich sehr über eine Antwort freuen.

Mit freundlichen Grüßen,
L.S.

 

[Firelion]

Hi,

im Prinzip dürfte es egal sein welche Sonde du nimmst solamge sie in der Sequenz bindet.
Aber das Repeat zu benutzen bietet sich an.

Du schneisdest die DNA vorher mot Restriktionsenzymen vor und naxch den Repeats und trennst sdie dann mittels Gelelektrophorese auf.

11 Repeats sind ein gtößeres Fragment als 1 Repeat und größere Fragmente laufen im Gellangsamer als kleinere. das heißt sie sind näher an der Tasche. Da du weißt wie groß wie viele Reüpeats wären, kannst du dann an der größe Ablesen wieviele Repeats, derjenige hat. Aber vorsicht: Hetereozygote haben 2 unterschiedlich lange Fragmente.

Auf diese Art und weiße kammst du dimmer die selbe Sonde nehmen.



Das sieht dann ungefähr so aus:
http://dwb.unl.edu/Teacher/NSF/C08/C08Links/www.piopio.school.nz/images/rflp.gif
Stell dir anstelle der kB angaben einfach Nr von Repeats vor.


LG Firelion